A prova de Imunodifusão Radial (IDR) é um método in vitro conveniente para determinar a concentração de antígenos no produto final como um todo, de vacinas anti-rábicas para uso veterinário. Os reativos padrões candidatos para uso na prova IDR, proposta para o controle de processo de vacinas de cultivo celular, elaboradas na América Latina e Caribe, foram produzidos e padronizados no Instituto Panamericano de Proteção de Alimentos e Zoonoses (INPPAZ). A validação dos padrões e o controle de qualidade de 28 lotes de vacinas anti-rábicas, de diferentes procedências, foram realizados na Faculdade de Ciências Veterinárias da Universidade de La Plata, Argentina (UNLP). Todas as vacinas foram elaboradas com virus rábico cepa Pasteur (PV) em células BHK e sua atividade foi determinada através de provas in vivo (NIH) e in vitro (IDR). Os resultados dos reativos, candidatos para as provas de padronização, demonstraram estabilidade, sensibilidade e reprodutibilidade. Por análise de variância e de regressão foi estimada a potência relativa de 1.2 entre as vacinas problemas e a vacina de referência. Os resultados deste estudo de validação indicam que o INPPAZ, está em condições de elaborar e distribuir os reativos padrões acima mencionados e apoiar a adoção da técnica de IDR (sensível, rápida, econômica) pelos laboratórios de produção de vacinas anti-rábicas da América Latina e Caribe.

The RID assay is one of the in vitro methods used for in-process control in the production of rabies vaccines for veterinary use. It has been shown to be very useful for determining antigen concentration in the final bulk product. The work presented in this paper, including the production and standardization of candidate standard reagents for use in the Radial Immunodiffusion Assay (RID) was carried out at the Pan American Institute for Food Protection and Zoonoses (INPPAZ/PAHO/WHO). The study was completed with the cooperation of the Faculty of Veterinary Sciences, National University of La Plata (NULP), Argentina, where the validation of the proposed standards and the quality control of samples from 28 different batches of rabies vaccines produced with Pasteur strain rabies virus (PV) in BHK cells were performed. The activity of the vaccines was determined by in vivo (NIH) and in vitro (RID)assays. The results of the candidate reagents for the reagent standardization tests showed stability, sensitivity and reproducibility. The Relative Potency the 1.2 between the problem vaccines and the reference vaccine was estimated by variance and regression analysis. The results of our validation study show that the INPPAZ (PAHO/WHO) is capable of producing and distributing the above-mentioned standard reagents, as well as of providing support for the incorporation of the RID technique (sensitive, rapid and inexpensive) to the laboratories that manufacture rabies vaccines in Latin America and the Caribbean.

Para a determinação do nível de anticorpos de vinte e quatro amostras de soros eqüinos hiperimunes contra a Raiva, foram utilizadas as técnicas de soroneutralização em camundongos (SN) e contraimunoeletroforese (CIE). As provas foram realizadas nos Institutos Butantan (IB) e Panamericano de Protección de Alimentos y Zoonosis (INPPAZ). A análise estatística demonstrou que para a SN e CIE feitas no IB, a correlação foi de r=0,9317, enquanto que no INPPAZ foi de r=0,974. Comparando-se os dados obtidos pela CIE nos dois laboratórios observou-se uma correlação de r=0,845. A técnica de CIE demonstrou ser tão sensível e eficiente quanto a SN na titulação de soros anti-rábicos hiperimunes de origem eqüina. Assim, com base nos resultados de CIE, que é uma técnica simples, rápida e econômica, pode-se estimar os títulos de anticorpos dos soros em SN.

To determine the rabies antibody level of twenty-four hyperimmune equine sera, Standard Mouse Neutralization (SMN) and Couterimmunoelectrophoresis (CIE) tests were carried out, both at the Instituto Butantan (IB) and Instituto Panamericano de Protección de Alimentos y Zoonosis (INPPAZ). Statistical analysis has shown a correlation (r) of 0.9317 between the SMN and CIE performed at the IB, while at the INPPAZ it scored 0.974. Comparison of CIE data of both laboratories yielded a correlation of 0.845. The CIE technique has shown to be as sensitive and efficient as the SMN in titrating antirabies hyperimmune equine sera. Based on CIE results, a simple, rapid and inexpensive technique, tilers of sera antibody can be reliably estimated in SMN test.